ʻO ka hoʻohana ʻana a me ka mālama ʻana i ka pahu ultrafiltration centrifuge
1) E koho i kahi paipu ultrafiltration kūpono.E hoʻomaopopo he ʻokoʻa nā membrane UF i ko lākou kiʻekiʻe o ka hoʻomanawanui i nā kemika like ʻole.ʻO ka maʻamau, hiki ke koho ʻia nā paipu ultrafiltration me kahi ʻoki paona molekala 10 kDa me kahi ʻoki paona molekala ʻaʻole pono e ʻoi aku ma mua o 1 / 3 o ke kaumaha molekala o ka protein o ka hoihoi, e like me 35 kDa.Inā ma kahi o 10 kd ke kaumaha molekala o ka polokina o ka hoihoi, hiki ke hoʻohana i kahi paipu ultrafiltration me kahi ʻoki kaumaha molekala o 3 KD.
(2) Ua maloʻo ka ultrafiltration, i kūʻai hou ʻia, me ka wai ultrapure i hoʻohui ʻia ma mua o ka hoʻohana ʻana a hele ka wai i loko o ka membrane, ʻauʻau hau a i ʻole ka pahu hau i hoʻoluʻu mua ʻia no kekahi mau minuke.A laila, ninini ʻia ka wai, ʻo ia hoʻi ka wai protein, a me ka nui o ka mea i hoʻohui ʻia, inā ʻaʻole i ʻoi aku ma mua o ka laina keʻokeʻo ma luna o ka paipu.Maʻalahi ka hana, a pono e hoʻomaloʻo ʻia ka pahu ultrafiltration i ka hau ma mua o ka hoʻohui ʻana i ka hopena protein.
3) Pono ka nuipa a me ke kikowaena o ka umekaumaha i ke kaulike.E hoʻomaopopo i ka wikiwiki o ka hoʻololi ʻana a me ka wikiwiki ʻaʻole wikiwiki loa, i ʻole e hōʻino pololei i ka membrane ultrafiltration.Ua hoʻomaka ʻia ka ultrafiltration centrifugal (ua hoʻomaka mua ka centrifuge i 4 degere).Ma hope o ka hoʻololi ʻia ʻana o ka RPM o nā centrifuges like ʻole i g, ʻokoʻa ia.Ua hoʻololiʻia ka wikiwiki o ka centrifuge i ka liʻiliʻi, e ho'ēmi ana i ke kaomi ma ka membrane.E hoʻomanaʻo, e haʻalele i ka centrifuge ma hope o ka hiki ʻana o ka centrifuge i kona wikiwiki e hele ai, a i ʻole he pilikia ʻoe, ʻaʻole hiki iā ʻoe ke mālama iā ia no ka manawa mua.Ua hoʻoponopono ʻia ka hoʻonohonoho ʻana o ka membrane i ka spindle e like me nā ʻōlelo aʻoaʻo (ʻo ka hihia centrifuge angular he membrane i ke axis perpendicular).Ma ka hoʻohana pono ʻana, ʻoi aku ka haʻahaʻa o ka wikiwiki o ka hoʻololi ʻana ma mua o nā kuhikuhi, i hiki ke hoʻonui ʻia ke ola o ka pahu centrifuge.
3) Pono ka nuipa a me ke kikowaena o ka umekaumaha i ke kaulike.E hoʻomaopopo i ka wikiwiki o ka hoʻololi ʻana a me ka wikiwiki ʻaʻole wikiwiki loa, i ʻole e hōʻino pololei i ka membrane ultrafiltration.Ua hoʻomaka ʻia ka ultrafiltration centrifugal (ua hoʻomaka mua ka centrifuge i 4 degere).Ma hope o ka hoʻololi ʻia ʻana o ka RPM o nā centrifuges like ʻole i g, ʻokoʻa ia.Ua hoʻololiʻia ka wikiwiki o ka centrifuge i ka liʻiliʻi, e ho'ēmi ana i ke kaomi ma ka membrane.E hoʻomanaʻo, e haʻalele i ka centrifuge ma hope o ka hiki ʻana o ka centrifuge i kona wikiwiki e hele ai, a i ʻole he pilikia ʻoe, ʻaʻole hiki iā ʻoe ke mālama iā ia no ka manawa mua.Ua hoʻoponopono ʻia ka hoʻonohonoho ʻana o ka membrane i ka spindle e like me nā ʻōlelo aʻoaʻo (ʻo ka hihia centrifuge angular he membrane i ke axis perpendicular).I ka hoʻohana pono ʻana, ʻoi aku ka haʻahaʻa o ka wikiwiki o ka hoʻololi ʻana ma mua o nā kuhikuhi, i hiki ke hoʻonui ʻia ke ola o ka pahu centrifuge.
(4) Ke hoʻopaʻa ʻia i ke koena 1ml, e lawe i 50ul o ka hoʻonā paʻa, e hoʻohui i 10ul o ka kahe a ʻike inā loaʻa kekahi kala polū, i mea e hoʻoholo ai inā ʻaʻole nalo ka pūmua ultrafiltration.Inā liki ka paipu, ninini hou i ka papa luna a kahe i loko o kahi paipu hou e hoʻomaka i ka ultrafiltration.No ka hoʻoholo pololei ʻana inā ua nalo nā paipu, centrifuge no 10min me 5mgml o BSA ma mua o ka kahe ʻana, e holo ana ma luna o ke kāpili protein, a i ʻole Bradford crude assay, a hoʻomau i ka hoʻohui ʻana i ke koena o ka hopena protein concentrated (e hana ana ma ka hau a pale i nā protein mai ka wela) a hiki i ka ua hoʻohui ʻia nā mea a pau.E mālama i ka wā centrifugation inā hiki mai ka ua o nā protein, e alakaʻi ana i ka pani ʻana o ka paipu.Inā hiki mai ka ua, e ho'oholo inā he kumu nui o ka ua no ka nui o ka protein a i 'ole ka pale kūpono;Hiki ke hoʻoholo ʻia ka mea mua e ka ultrafiltration o nā paipu ultrafiltration he nui i ka manawa like, e hoʻemi ana i ka neʻe ʻana, a ʻo ka mea hope ma ke hoʻololi ʻana i nā ʻoluʻolu paʻa like ʻole a hiki i ka hiki ʻole o ka ua o ka protein.
(4) Ke hoʻopaʻa ʻia i ke koena 1ml, e lawe i 50ul o ka hoʻonā paʻa, e hoʻohui i 10ul o ka kahe a ʻike inā loaʻa kekahi kala polū, i mea e hoʻoholo ai inā ʻaʻole nalo ka pūmua ultrafiltration.Inā liki ka paipu, ninini hou i ka papa luna a kahe i loko o kahi paipu hou e hoʻomaka i ka ultrafiltration.No ka hoʻoholo pololei ʻana inā ua nalo nā paipu, centrifuge no 10min me 5mgml o BSA ma mua o ka kahe ʻana, e holo ana ma luna o ke kāpili protein, a i ʻole Bradford crude assay, a hoʻomau i ka hoʻohui ʻana i ke koena o ka hopena protein concentrated (e hana ana ma ka hau a pale i nā protein mai ka wela) a hiki i ka ua hoʻohui ʻia nā mea a pau.E mālama i ka manawa centrifugation inā hiki mai ka ua o nā protein, e alakaʻi ana i ka pani ʻana o ka paipu.Inā hiki mai ka ua, e ho'oholo inā he kumu nui o ka ua no ka nui o ka protein a i 'ole he pale kūpono 'ole;Hiki ke hoʻoholo ʻia ka mea mua e ka ultrafiltration o nā paipu ultrafiltration he nui i ka manawa like, e hoʻemi ana i ka neʻe ʻana, a ʻo ka mea hope ma ka hoʻololi ʻana i nā ʻoluʻolu paʻa ʻokoʻa a hiki i ka hiki ʻole o ka ua o ka protein.
(5) Hoʻohana ʻia nā ʻanuʻu mua no ka hoʻopaʻa ʻana i ka protein, a inā e hoʻololi ʻia ka buffer, e hoʻohui mālie i ka buffer hou (ultrafiltration ma o ka 0.22um ultrafiltration membrane) ma kahi o 1ml o ka nui o ka protein, a e hoʻohuli hou i kahi 1ml no ʻekolu. nā manawa like ʻole, me ka leo hope i hoʻopaʻa ʻia ma muli o ka ʻike protein makemake ʻia, maʻamau ʻaʻole ʻoi aku ma mua o 500ul, akā i loko o 200ul.Loaʻa i ka 1000 × a ʻoi aʻe paha i ʻekolu mau manawa, e like me ka nui o ka hoʻololi pale, e like me ka helu ʻana ma ka liʻiliʻi 10 × a i ʻole ka hoʻonui ʻana i ka leo i kēlā me kēia manawa.
(5) Hoʻohana ʻia nā ʻanuʻu mua no ka hoʻopaʻa ʻana i ka protein, a inā e hoʻololi ʻia ka buffer, e hoʻohui mālie i ka buffer hou (ultrafiltration ma o ka 0.22um ultrafiltration membrane) ma kahi o 1ml o ka nui o ka protein, a e hoʻohuli hou i kahi 1ml no ʻekolu. nā manawa like ʻole, me ka leo hope i hoʻopaʻa ʻia ma muli o ka ʻike protein makemake ʻia, maʻamau ʻaʻole ʻoi aku ma mua o 500ul, akā i loko o 200ul.Loaʻa i ka 1000 × a ʻoi aʻe paha i ʻekolu mau manawa, e like me ka nui o ka hoʻololi pale, e like me ka helu ʻana ma ka liʻiliʻi 10 × a i ʻole ka hoʻonui ʻana i ka leo i kēlā me kēia manawa.
Ka manawa hoʻouna: Nov-09-2022